|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Target Knock Down und funktionelle Auswirkungen des Knock Down auf das Testsystem
Ich möchte wissen, in welcher Zellinie mein Target am stärksten exprimiert ist.
RNAx testet die Expression des Targets in Zellinien Ihrer Wahl
Hier ein Beispiel für einen typischen Verlauf eines solchen Experiments:
- Der Kunde liefert RNAx die Accession Number des Targets
Die Messung verläuft in folgenden Schritten:
- Design der r/t Primer
- Isolierung der RNA aus den Zellen
- Durchführen der r/t PCR
- Zusammenstellung der Daten
- Lieferung der Ergebnisse an den Kunden
...zurück
|
|
|
Target Knock Down und funktionelle Auswirkungen des Knock Down auf das Testsystem
Ich möchte die Expression eines Targets mittels siRNA-Technologie inhibieren, der Nachweis der Inhibierung soll quantitativ auf mRNA-Ebene erfolgen
RNAx designt siRNA oligos und führt die Knock Down Experimente durch. Der Knock Down wird durch real time PCR gemessen.
Hier ein Beispiel für einen typischen Verlauf eines Knock Down Experiments
- Der Kunde liefert RNAx die Accession Number des Targets sowie Informationen zur Expression der Targetsequenz in Zellinien
- RNAx führt die Validierung in in-house Zellinien durch, wenn die Targetsequenz dort exprimiert wird
- Wenn die Targetsequenz nicht in in-house Zellinien exprimiert wird, paßt RNAx die Zellinien des Kunden an das automatisierte set-up an
Die Validierung verläuft in folgenden Schritten:
- Test der Expression der Targetsequenz in in-house Zellinien
- Design der Oligonukleotide für die real-time PCR
- Design von 2 siRNA oligos pro Target
- Transfektion der siRNAs in die Zellinie in Triplikaten (drei unabhängige Wiederholungen)
- Parallel dazu wird ein Kontrollexperiment ausgeführt
- RNA-Isolierung
- real time PCR
- Zusammenstellung der Daten
- Lieferung der Ergebnisse an den Kunden
...zurück
|
|
|
Target Knock Down und funktionelle Auswirkungen des Knock Down auf das Testsystem
Ich möchte die Expression eines Targets mittels siRNA-Technologie inhibieren, der Nachweis der Inhibierung soll auf Protein-Ebene erfolgen
RNAx designt siRNA oligos und führt die Knock Down Experimente durch. Der Knock Down wird durch real time PCR und Immunoblot gemessen.
Hier ein Beispiel für einen typischen Verlauf eines Knock Down Experiments
- Der Kunde liefert RNAx die Accession Number des Targets sowie Informationen zur Expression der Targetsequenz in Zellinien
- RNAx führt die Validierung in in-house Zellinien durch, wenn die Targetsequenz dort exprimiert wird
- Wenn die Targetsequenz nicht in in-house Zellinien exprimiert wird, paßt RNAx die Zellinien des Kunden an das automatisierte set-up an
Die Validierung verläuft in folgenden Schritten:
- Test der Expression der Targetsequenz in in-house Zellinien
- Design der Oligonukleotide für die real-time PCR
- Design von 2 siRNA oligos pro Target
- Transfektion der siRNAs in die Zellinie in Triplikaten (drei unabhängige Wiederholungen)
- Parallel dazu wird ein Kontrollexperiment ausgeführt
- RNA-Isolierung
- real time PCR
- Durchführung eines Immunoblot, um den Protein-Knock Down nachzuweisen
- Zusammenstellung der Daten
- Lieferung der Ergebnisse an den Kunden
...zurück
|
|
|
Target Knock Down und funktionelle Auswirkungen des Knock Down auf das Testsystem
Ich möchte die Expression eines Targets mittels siRNA-Technologie inhibieren, der Nachweis der Inhibierung soll durch funktionelle Assays erfolgen
RNAx designt siRNA oligos und führt die Knock Down Experimente durch. Der Knock Down wird durch real time PCR und funktionelle Assays gemessen.
Hier ein Beispiel für einen typischen Verlauf eines Knock Down Experiments
- Der Kunde liefert RNAx die Accession Number des Targets sowie Informationen zur Expression der Targetsequenz in Zellinien
- RNAx führt die Validierung in in-house Zellinien durch, wenn die Targetsequenz dort exprimiert wird
- Wenn die Targetsequenz nicht in in-house Zellinien exprimiert wird, paßt RNAx die Zellinien des Kunden an das automatisierte set-up an
Die Validierung verläuft in folgenden Schritten:
- Test der Expression der Targetsequenz in in-house Zellinien
- Design der Oligonukleotide für die real-time PCR
- Design von 2 siRNA oligos pro Target
- Transfektion der siRNAs in die Zellinie in Triplikaten (drei unabhängige Wiederholungen)
- Parallel dazu wird ein Kontrollexperiment ausgeführt
- RNA-Isolierung
- real time PCR
- Durchführung des funktionellen Assays
(Liste verfügbarer Assays: ...hier)
- Zusammenstellung der Daten
- Lieferung der Ergebnisse an den Kunden
...zurück
|
|
|
Funktionelle Validierung von shRNAs und Target Knock Down
Ich benötige eine funktionierende shRNA und möchte einen Target Knock Down durchführen
RNAx designt shRNA-kodierende DNA-Oligonukleotidpaare und führt Knock Down Experimente durch. Der Knock Down wird durch real time PCR gemessen.
Hier ein Beispiel für einen typischen Ablauf:
- Der Kunde liefert die accession number der Targets
- RNAx führt die Knock Down Experimente in etablierten in-house Zellinien durch, falls das Target in diesen exprimiert ist
- Ist das Target nicht in in-house Zellinien exprimiert, adaptiert RNAx die Zellinie des Kunden an den automitisierten set up
Die Validierung verläuft in folgenden Schritten:
- Test der Expression der Targetsequenz in in-house Zellinien
- Design der Oligonukleotide für die real-time PCR
- Design von vier shRNA-kodierenden DNA-Oligonukleotidpaaren pro Target
- Klonierung der shRNA-kodierenden DNA-Oligonukleotidpaare in einen Vektor und Verifizierung des Konstrukts durch Sequenzierung
- Generierung des Virus durch Transfektion der shRNA Konstrukte gemeinsam mit dem packaging Plasmid (in Triplikaten, jeweils dreimal unabhängig voneinander)
- Parallel dazu wird ein Kontrollexperiment ausgeführt
- Infektion einer Zellinie mit dem Virus
- RNA Isolierung
- Real time PCR
- Zusammenstellung der Daten
- Lieferung der Daten an den Kunden
...zurück
|
|
|
RNAi-Screens
zur Target-Identifizierung mit anschließender Hitvalidierung
RNAx bietet Ihnen die automatisierte Durchführung von RNAi-Screens. So können auch Sie von dieser effizienten Technologie profitieren, auch wenn Sie nicht über die entsprechende Expertise oder Geräteausrüstung verfügen.
Sehen Sie hier ein Beispiel für einen solchen Screen, den wir natürlich ganz auf Ihre spezifische Situation abstimmen. ...lesen